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如何构建载体

载体构建目的 ①用它作为运载工具,将目的基因转移到宿主细胞中去。 ②利用他在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制(称为克隆)。 理想的运载体是质粒(plasmid),在基因工程中,常用人工构建的质粒作为载体。 具体过程详解如下图所示:

技术原理: 生物界同源重组现象的发现,为基因打靶奠定了坚实的理论基础,而胚胎干细胞技术的发展,促进了基因打靶的广泛应用。同源重组又称一般性重组或非特异性重组,是指相似的DNA交换遗传信息的过程, 外源DNA片段可与宿主基因组的相应片段发...

构建表达载体首先取决于你的实验目的,例如你的实验是否要求你的蛋白表达出来必须可溶性蛋白,载体上面的标签决定了你的纯化方法,当然也决定了实验成本,等等一系列需求。 拿带标签的载体为例,因为带标签后可以增加蛋白质的可溶性,也为纯化带...

在RNA干扰实验中 首先需要构建dsRNA表达载体 将这种载体导入受体细胞中后 表达产生的dsRNA在DICER酶作用下形成siRNA 引起具有相同序列的mRNA发生讲解 导致细胞或个体不能合成相应的蛋白质 所以个体会表现出功能缺失表型 构建表达载体通常选用dsR...

构建突变载体的方法主要是采用高GC多位点定点PCR扩增发,引起扩增时载体序列重叠,从而获得和构建突变载体.当然,突变载体要和目标低表达基因有同源性或相近性,在复制和表达时,可以实现替代. 然后将突变载体导入宿主细胞中进行突变载体与宿主细胞基...

我汗 你这没个师兄师姐啥的么 质粒你自己买或者找别的实验室要去。。。 目的基因的引物设计用primer premier5 酶切位点和保护碱基自己去查 首先用PCR从cDNA里面把你的目的基因扩增出来 然后跑琼脂糖胶回收 然后做酶切 切多久根据酶不同 把质粒载...

1. 通过PCR扩增目的基因片段 PCR要设计引物,设计引物时要选择合适的同源序列,根据质粒载体和基因序列要选择合适的酶切位点,PCR的产物要纯化。 2. 酶切 根据引物设计的酶切位点,分别对PCR产物和质粒载体进行酶切,酶切后的产物也要进行回收 3...

先看表达载体有哪些合适的酶切位点,比如NdeI,NcoI这样识别序列有ATG起始密码子的,再看看目的基因含不含有这些位点,含有就不好连接了,挑好位点,计算下读码框是否正确,保证核糖体结合位点后的第一个ATG与目的基因是间隔3的倍数个碱基。下游...

我用过这个载体,这个载体上本身就有一个抗性基因,它是抗卡纳的载体,我当时用的是BamHI和HindIII切的,你可以查一下这个载体的图谱,EcorI和BamHI应该没有切开这个抗性基因.如果这个抗性基因真的被切开了,那就只能插入抗性基因了,不过做双突变载体...

在RNA干扰实验中 首先需要构建dsRNA表达载体 将这种载体导入受体细胞中后 表达产生的dsRNA在DICER酶作用下形成siRNA 引起具有相同序列的mRNA发生讲解 导致细胞或个体不能合成相应的蛋白质 所以个体会表现出功能缺失表型 构建表达载体通常选用dsR...

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